Preparatų mikroskopija mažu ir vidutiniu padidinimu. Medžiagos paruošimas darbui su mikroskopu Nuolatinis preparatas tiriamas mažu padidinimu.
1. Mikroskopo montavimas darbo vietoje yra svarbi sėkmingo darbo sąlyga. Mikroskopas turi būti pastatytas, orientuotas stebėti kaire akimi, maždaug 3 cm atstumu nuo stalo krašto.
2. Prieš naudodami, turite nuvalyti visas išorines mikroskopo dalis, neišimdami okuliaro.
3. Siekiant užtikrinti maksimalų scenos (ir bandinio) judėjimą, prieš pradedant dirbti su mikroskopu, sceną reikia sucentruoti, t.y. pasukite varžtus, kad jis būtų į vietą,
kuriame kondensatoriaus lęšis yra tiksliai scenos angos viduryje. Sceną reikia centruoti tiek darbo metu, tiek jį užbaigus.
4. Regėjimo lauko apšvietimas atliekama taip. Tiriant zoologinius judančius objektus, geriau naudoti įgaubtą veidrodį, prieš tai pakėlus kondensatorių iki galo. Geriausias apšvietimas gaunamas iš išsklaidytos dienos šviesos, tačiau galima naudoti ir kitus šviesos šaltinius. Reikėtų prisiminti, kad nepageidautina apšviesti regėjimo lauką per ryškiai ir su akinimu, kuris trikdo gyvus objektus ir yra pavojingas tyrėjo regėjimui. Matymo laukas turi būti apšviestas tolygiai. Jei jame aptinkama tamsių vietų, reikia patikrinti revolverio ir kondensatoriaus dalių padėtį. Tiriant skaidrius ar bespalvius objektus, matymo laukas turi būti užtemdytas uždarant diafragmą arba nuleidžiant kondensatorių. Žiūrint į tamsius, intensyvių spalvų objektus, reikia atidaryti diafragmą.
5. Vaizdo fokusavimas. Naudodami nuolatinį arba laikiną preparatą, pastatykite jį ant scenos.
Darbą reikia pradėti tyrinėjant objektą mažu didinimu, todėl pradedant ir baigiant darbą mikroskopą reikėtų nustatyti į mažą padidinimą. Galite suprasti, kad būtina įvykdyti šį reikalavimą, jei pasukant revolverį ir keičiant mažo padidinimo objektyvą (10 x arba 15 x) į didelį (40 x) pastebėjote atstumo tarp objektyvo apatinio galo ir bandinio pokyčius. ). Pradinė mažo didinimo lęšio padėtis yra ~ 1 cm nuo apatinio krašto iki bandinio.
Tiriant objektą, pagrindinę informaciją apie jį galima gauti esant mažam padidinimui, kai apšvietimas ir ryškumas yra optimalūs. Perjungę į didelį padidinimą, padidiname objekto dydį, tačiau žymiai prarandame bendro vaizdo aiškumą.
Esant mažam padidinimui, fokusavimas (paryškinimas) atliekamas naudojant makrosraigtį, nuolat kontroliuojant akis, t.y. neatitraukdami akių nuo okuliaro. Pasiekus reikiamą ryškumą (grubus fokusavimas makrosraigtu), galutinis fokusavimo reguliavimas atliekamas mikrosraigtu. Gerai nutaikius grubiai, mikrosraigto judėjimas viena ar kita kryptimi (nuo jūsų arba link jūsų) neturi viršyti dviejų pilnų apsisukimų. Priešingu atveju vėl turėtumėte naudoti makrosraigtį. Tai ypač svarbu dirbant su dideliu padidinimu, kai atstumas nuo objektyvo krašto iki bandinio yra labai didelis
18 Techninės priemonės mikroskopiniams objektams tirti
Binokulinis stereoskopinis mikroskopas (MBS) 19
mažai. Esant dideliam padidinimui, turėtumėte naudoti tik mikrosraigtą, prieš tai atlikę grubų taikymą mažu padidinimu, o tada pasukę revolverį, kad nustatytumėte didelį padidinimą. Baigus tirti mėginį dideliu padidinimu, mikroskopą reikia nedelsiant perjungti į mažą didinimą.
Dirbdami su skirtingo didinimo objektyvais, turite atsiminti du svarbius dalykus.
Pirma, mikroskopas suteikia plokštuminį objekto vaizdą. Todėl, esant dideliam padidinimui, aiškiai matome labai ploną plokštumą, viskas, kas yra aukščiau ar žemiau, nėra aiškiai matoma, todėl reikia nuolat dirbti su mikrosraigtu, kad pamatytume visas struktūras. Naudojant mažos galios objektyvą, dominanti plokštuma yra storesnė ir dažnai leidžia aiškiai matyti visą objektą.
Antroji darbo su skirtingais didinimais ypatybė yra susijusi su apšvietimu. Maža įėjimo anga ir didelio didinimo objektyvų savybės praleidžia labai siaurą šviesos spindulių spindulį, todėl pereinant nuo mažo prie didelio didinimo prarandame nemenką objekto apšvietimo intensyvumą. Kondensatoriaus diafragma turi būti atidaryta.
6. Vaisto perkėlimas scenoje mažu padidinimu atliekamas rankiniu būdu. Tam tikras sunkumas yra tas, kad optinė mikroskopo sistema suteikia atvirkštinį vaizdą. Norint suprasti, reikia tam tikrų įgūdžių: viskas, ką matome iš viršaus, iš tikrųjų yra apačioje, tai, kas yra dešinėje, yra kairėje ir atvirkščiai.
Perjungiant į didelį padidinimą, bandinio judėjimas turi būti labai tikslus ir atliekamas naudojant scenos varžtus. Pereinant nuo mažo didinimo prie didelio, tiriamas objektas ar jo dalis, judant preparatą, pirmiausia turi būti patalpinti mažo didinimo matymo lauko centre ir tik tada perkelti į didelį didinimą.
Mikroskopas, kaip ir bet kuris tikslus instrumentas, reikalauja kruopštaus tvarkymo. Nuvalykite jį, ypač okuliarą ir objektyvus iš minkšto, lengvai pažeidžiamo stiklo, atsargiai, naudodami minkštas, sausas, daug kartų skalbtas linines servetėles. Nenaudokite alkoholio stiklui valyti, nes... dėl to specialios dangos ištirpsta, o optika tampa drumsta.
Jūs negalite patys atsukti okuliarų ir lęšių. Jų žalą gali pašalinti tik specialistas.
Binokulinis stereoskopinis mikroskopas (MBS)
Trimačiams organizmams tirti ir gana stambių (ne mikroskopinių) gyvūnų judėjimui, maitinimuisi ir kitokioms elgsenos formoms stebėti, taip pat jų skrodimui naudojami mažo didinimo binokuliniai stereoskopiniai mikroskopai (MBS). Jie suteikia tiesioginį vaizdą, turi didelį matymo lauką ir platų skiriamosios gebos padidinimą (2 lentelė). Naudodami MBS galite tyrinėti skaidrius vandens telkinius skleidžiamoje šviesos sraute, o nepermatomus, tamsius – atspindėtoje šviesoje. Šiuo metu naudojami MBS-9 ir MBS-10 modeliai (3 pav.).
2 lentelė Objektų padidinimo koeficientas žiūronu mikroskopu naudojant skirtingus lęšius ir okuliarus
| Okuliarai | ||||||
| Objektyvai | 6" | 8" | 12,5 x | 14" | ||
| 0,6" | 3,5 | 4,5 | 8,1 | |||
| aš x | 12,5 | 14,3 | ||||
| 2" | 28,6 | |||||
| 4 x | 57,2 | |||||
| 7 x |
Optika MBS bloką sudaro optinė galvutė ir okuliaro tvirtinimas.
Visos optinės dalys yra sumontuotos optinėje galvutėje, įskaitant mikroskopo lęšį, virš kurio sumontuotas būgnas su Galilean sistemomis. Būgno ašis baigiasi išorėje iš abiejų pusių esančiomis rankenėlėmis, pasukus perjungiami didinimai, kurių reikšmės pažymėtos ant rankenų (7 x, 4 x, 2 x, I x, 0,6 x) .
Norėdami nustatyti norimą padidinimą, turite pasukti būgną ir sulygiuoti skaičių ant rankenos su tašku ant guolio. Šiuo atveju nereikia persiorientuoti. Būgno padėtis fiksuojama spragtelėjimu. Optinės galvutės lęšis fokusuojamas ant kreiptuvo esančiais varžtais, kurių pagalba galvutė pakeliama arba nuleidžiama mikroskopo pakopos atžvilgiu.
20 Techninės priemonės mikroskopiniams objektams tirti
Okuliaro tvirtinimas susideda iš dviejų prizmių, uždengtų kilnojamais rėmeliais, ant kurių pritvirtinami okuliaro vamzdeliai. Judindami prizmių opines siūles, galite pakeisti atstumą tarp tdv6ok okuliaro lęšių centrų, pritaikydami jų padėtį tyrėjo akių atstumui tarp vyzdžių.
Objektų stalas yra nuimamas, montuojamas ir tvirtinamas varžtu ant specialaus pagrindo. Galinėje stalo pagrindo sienelėje yra šviestuvo lizdas. Pagrindo viduje yra veidrodis su matiniais ir veidrodiniais paviršiais bei rankena jį pasukti reguliuojant matymo lauko apšvietimą.
Apšvietimo sistemoje, be veidrodžio, yra specialus šviestuvas, susidedantis iš kondensatoriaus ir kaitrinės lempos, sujungtos bendro korpuso.
Tirti objektą galima atspindėtoje ir sklindančioje šviesoje. Kad apšvietimas veiktų atspindintoje šviesoje, jis montuojamas ant šarnyrinio laikiklio. Stebėjimui skleidžiamoje šviesoje iliuminatorius perkeliamas į objekto scenos pagrindo lizdą.
Priklausomai nuo objekto konstrukcinių savybių (jo tankio, skaidrumo, spalvos), objekto stalo anga gali būti uždaroma stikline arba metaline plokšte, kurios viena pusė nudažyta baltai, kita juodai.
Pasiruošimas mikroskopijai
Tyrimui mikroskopu naudojami iš anksto paruošti nuolatiniai preparatai (jų gamyba reikalauja tam tikrų įgūdžių ir laiko) arba ruošiami laikini preparatai, vykstant darbui. Medžiaga jiems gali būti ištisi mikroskopiniai arba gana smulkūs daiktai (visi preparatai) arba jų kūno dalys.
Dirbant su mikroskopu, ant stiklinės stiklelio dedamas bet koks objektas – standartinio dydžio (76 x 26 mm) stiklo plokštė. Labai mažai objektų matosi sausi, dažniausiai vandens ar kito skysčio laše. Siekiant apsaugoti objektyvus nuo drėgmės, ant stiklinio stiklelio įdėta medžiaga skysčio laše uždengiama dengiamuoju stikleliu. Įprastas jo dydis yra 18 x 18 mm. Jis pagamintas iš aukštos kokybės stiklo, labai plonas ir trapus.
Techninės priemonės mikroskopiniams objektams tirti
Tiriama medžiaga būtina uždengti skysčio lašą, kad ant preparato neliktų oro burbuliukų. Norėdami tai padaryti, dangtelį laikydami už dviejų kampų, įdėkite priešingą jo kraštą į skysčio lašą ir palaipsniui nuleiskite stiklą (4 pav.). Likusius burbulus atskirti nesunku: jie turi platų tamsų apvadą, o paviršius – veidrodinio blizgesio. Dideli burbuliukai taip pat turi tamsią apvadą, o jų vidinis paviršius primena aprasojusį stiklą.
Dengiant paruoštą laikiną preparatą dengiamuoju stiklu, būtina atsižvelgti į tiriamo objekto tūrį, antraip jis gali deformuotis ar sutraiškyti nuo stiklo svorio. Norėdami to išvengti, ant dengiamojo stiklo užtepamos vaško pėdelės. Įprastas grynas bičių vaškas kaitinant (ir atidžiai laikantis priešgaisrinės saugos taisyklių!) maišomas su terpentinu santykiu 2,5:1. Šią masę galima laikyti ilgai, geriausia stikliniame butelyje ar dėžutėje. Prieš naudodami vašką šiek tiek paminkykite pirštais, kad jis taptų lankstesnis. Tada visi keturi dengiamojo stiklo kampai, jais lengvai subraižydami gumulą, įrengiami norimo aukščio vaškinėmis kojelėmis ir uždenkite daiktą ant preparato, nukreipdami dengiantį stiklą kojelėmis žemyn.
Sub karalystė Pirmuonys - pirmuonys Tipas Sarcomastigophora - sarkomastigoforai
Prieglauda vienija daugiau nei 25 000 pirmuonių rūšių. Nemažai dėmesio skiriama jos atstovų pažinimui bestuburių zoologijos laboratoriniame seminare. Visų pirma, planuojama supažindinti studentus su pirmuoniais, priklausančiais trims reikšmingiausioms subfilėms: sarcodidae, flagellate ir opalinate.
Potipis Sarcodina - sarkodas
Gyvūnų tyrimai tradiciškai pradedami nuo vienaląsčių organizmų, o tarp pastarųjų – nuo Sarcodidae. Patogiausias objektas – gėlavandenių amebų grupė. Jie yra neaktyvūs, gana paprastos struktūros ir lengvai auginami laboratorijoje. Visa tai leidžia jiems lengviau mokytis.
Potipio atstovams dažniausiai būdingas ameboidinis judėjimas. Jie gyvena vandens aplinkoje, dirvožemyje, yra parazitinių formų.
Superklasė Rhizopoda -šakniastiebiai
Vienija organizmus su pseudopodijomis, kurios neturi labai diferencijuotų vidinių skeleto darinių.
Klasė Lobosea
Ameboidinės formos su skilties formos pseudopodijomis (lobopodijomis), kurioms nebūdingas susiliejimas į tinklą panašias struktūras.
1. Nuolatinis preparatas buvo tiriamas esant mažam didinimui, tačiau perjungus į didelį didinimą objekto nesimato, net koreguojant makro ir mikrometriniais varžtais bei pakankamu apšvietimu. Reikia nustatyti, su kuo tai gali būti susiję?
2. Mėginys dedamas ant mikroskopo, kurio trikojo kojos apačioje yra veidrodis, scenos. Žiūrovuose yra silpna dirbtinė šviesa. Objektas aiškiai matomas esant mažam didinimui, tačiau bandant jį žiūrėti su x40 objektyvo padidinimu objekto nesimato matymo lauke, matosi tamsi dėmė. Reikia nustatyti, su kuo tai gali būti susiję?
3. Bandinys buvo pažeistas: išdaužtas stiklelis ir dangtelis. Paaiškinkite, kaip tai gali atsitikti?
4. Bendras mikroskopo padidinimas vienu atveju yra 280, kitu - 900. Paaiškinkite, kokie lęšiai ir okuliarai buvo naudojami pirmuoju ir antruoju atveju ir kokius objektus jie leidžia tirti?
5. Jums buvo suteiktas nuolatinis pasiruošimas tirti objektą dideliu mikroskopo padidinimu. Kaip turėtų būti padėtas mėginys, kad objektas būtų matomas dideliu padidinimu? Paaiškinkite, kodėl neteisingą manipuliavimą vaistu galima nustatyti tik naudojant didelį padidinimą.
6. Paaiškinkite, kokios perspektyvos gali laukti epitelio audinio ląstelės, kuri neturi centriolių?
7. Diploidinėje ląstelėje įvyko 7 kartus endoreduplikacija.
Kiek ji turi paveldimos medžiagos?
8. Viena iš esminių pradinių klasikinės genetikos išvadų – vyriškos ir moteriškos lyties lygybės idėja perduodant palikuonims paveldimą informaciją. Ar šią išvadą patvirtina lyginamoji viso paveldimos informacijos, kurią į zigotą įnešė spermatozoidas ir kiaušinėlis, analizė?
9. Po to, kai ląstelė išėjo iš mitozės, geno, turinčio helikazės fermento sintezės programą, įvyko mutacija.
Kaip šis įvykis paveiks ląstelės mitozinį ciklą?
10. Po apvaisinimo susidarė zigota 46,XX, iš kurios turėtų formuotis moters kūnas. Tačiau per pirmąjį mitozinį šios zigotos dalijimąsi (suskaldymą) į du blastomerus, viena iš dviejų X chromosomų nepasidalijo į dvi chromatides ir anafazėje visiškai persikėlė į ašigalį. Antrosios X chromosomos elgesys praėjo be nukrypimų nuo normos. Visi vėlesni mitoziniai ląstelių dalijimasis embriogenezės metu taip pat įvyko nepažeidžiant mitozės mechanizmo
Kokia bus individo, besivystančio iš šios zigotos, chromosomų ląstelių rinkinys ir (galbūt) šio organizmo fenotipinės savybės?
11. Visiems žinoma, kad identiški (monozigotiniai) dvyniai yra genetiškai identiški. Pagal jų fenotipą, atsižvelgiant į normalią jų formavimosi ir vystymosi citologinių procesų eigą tomis pačiomis aplinkos sąlygomis, jie yra panašūs vienas į kitą „kaip du žirniai ankštyje“.
Ar monozigotiniai dvyniai gali būti skirtingų lyčių – berniukas ir mergaitė? Jei jie negali, tai kodėl? Ir jei jie gali, tai kokie pažeidimai atsiranda dalijančios zigotos mitoziniame cikle?
2. Situacinės užduotys tema „Paveldimumo ir kintamumo molekuliniai pagrindai“
Genomas – bendrieji klausimai
1. Paaiškinkite situacijos, kai eukariotinės ląstelės genas, užimantis 2400 nukleotidų porų dydžio DNR sekciją, koduoja polipeptidą, susidedantį iš 180 aminorūgščių liekanų, priežastį.
Atsakymas: Norint užkoduoti 180 aminorūgščių liekanų, pakanka 540 nukleotidų (180 tripletų) DNR šablono grandinės. Plius tiek pat – kodavimo grandinė. Iš viso – 1080 nukleotidų arba 540 nukleotidų porų.
2. Analizuojant bakteriofago DNR nukleotidų sudėtį M 13, nustatytas toks kiekybinis azotinių bazių santykis: A-23%, G-21%, T-36%, C-20%. Kaip galėtume paaiškinti, kodėl šiuo atveju nesilaikoma Chargaff nustatyto lygiavertiškumo principo?
Atsakymas: Priežastis ta, kad bakteriofagas M13 (kaip ir dauguma fagų) turi vienos grandinės DNR.
Užduotis Nr.1
Tyrimui buvo pasiūlyti du mikropreparatai: 1) svogūno odelė ir 2) uodo sparnelis.
1. Su kuriais iš šių vaistų bus naudojamas didinamasis stiklas?
2. Tiriant kuris iš šių dviejų objektų bus naudojamas mikroskopu?
2 užduotis
Praktiniams darbams atlikti siūlomas laikinas ir nuolatinis pasirengimas.
1. Kaip atskirti laikiną narkotiką nuo nuolatinio?
2. Kodėl kai kuriems objektams tirti geriau naudoti laikiną mikro stiklelį?
Užduotis Nr.3
Matymo lauke, tiriant preparatą „Plaukų kryžius“ (plaukuose yra daug tamsiai rudo pigmento), mažu padidinimu matomi šie dariniai: storos tamsiai rudos juostelės, išdėstytos skersai, tamsios spalvos skirtingo skersmens burbuliukai, ilgi į siūlus panašūs dariniai su aiškiais kraštais, bet bespalviai.
1. Kurioje matymo lauke pateikiami artefaktai?
2. Koks šio narkotiko tyrimo objektas?
4 užduotis
Atsižvelgiama į trijų tipų ląsteles: svogūnų odos ląsteles, bakterijų ląsteles ir varlės odos epitelio ląsteles.
1. Kurią iš išvardytų ląstelių jau galima aiškiai matyti mikroskopo padidinimu (7x8)?
2. Kurias ląsteles galima pamatyti tik padidinus (7x40) ir panardinus?
5 problema
Remiantis pasiūlytu eilėraščiu:
"Jie nulupo odelę nuo svogūno -
Plonas, bespalvis,
Įdėkite žievelę
Ant stiklinės skaidrės,
Buvo sumontuotas mikroskopas
Vaistas yra ant stalo...“
1. Apie kokį narkotiką mes kalbame (laikiną ar nuolatinį)?
2. Kokie svarbūs punktai ruošiant vaistą čia nepažymėti?
6 problema
Nuolatinis preparatas buvo tiriamas esant mažam didinimui, tačiau perjungus į didelį didinimą objekto nesimato, net koreguojant makro ir mikrometriniais varžtais bei pakankamu apšvietimu.
1. Su kuo tai galėtų būti susiję?
2. Kaip ištaisyti šią klaidą?
Problema Nr.7
Mėginys dedamas ant mikroskopo, kurio trikojo kojos apačioje yra veidrodis, scenos. Žiūrovuose yra silpna dirbtinė šviesa. Objektas aiškiai matomas esant mažam didinimui, tačiau bandant jį žiūrėti su x40 objektyvo padidinimu objekto nesimato matymo lauke, matosi tamsi dėmė.
1. Kas gali sukelti tamsios dėmės atsiradimą?
2. Kaip ištaisyti klaidą?
Problema Nr.8
Bandinys buvo pažeistas: išdaužtas stiklelis ir dangtelis.
1. Kaip tai galėjo atsitikti?
2. Kokių taisyklių reikia laikytis atliekant mikroskopiją?
Problema Nr.9
Bendras mikroskopo padidinimas vienu atveju yra 280, kitu - 900.
1. Kokie lęšiai ir okuliarai buvo naudojami pirmuoju ir antruoju atveju?
2. Kokius objektus jie leidžia tyrinėti?
2 pamoka. EUKARIOTINĖS LĄSTELĖS BIOLOGIJA. Struktūriniai citoplazmos komponentai
Užduotis Nr.1
Yra žinoma, kad stuburiniai turi raudoną kraują, o kai kurie bestuburiai (galvakojai) – mėlyną.
1. Kokių mikroelementų buvimas lemia raudoną gyvūnų kraujo spalvą?
2. Dėl kokios priežasties moliuskų kraujas yra mėlynas?
2 užduotis
Kviečių grūduose ir saulėgrąžų sėklose gausu organinių medžiagų.
1. Kodėl miltų kokybė yra susijusi su glitimo kiekiu?
2. Kokių organinių medžiagų yra saulėgrąžų sėklose?
Užduotis Nr.3
Vaškinės neuronų lipofuscinozės gali pasireikšti įvairiame amžiuje (vaikystėje, paauglystėje, pilnametystėje) ir yra tikros saugojimo ligos, susijusios su membraninės struktūros organelių, turinčių daug hidrolizinių fermentų, disfunkcija. Simptomai yra centrinės nervų sistemos pažeidimo požymiai su smegenų atrofija ir traukulių priepuoliai. Diagnozė nustatoma elektroniniu mikroskopu – šiose daugelio audinių ląstelių organelėse randami patologiniai intarpai.
1. Kurio neurono organelio veikla sutrikusi?
2. Kokius ženklus naudojote tai atpažinti?
4 užduotis
Pacientui buvo diagnozuota reta glikoproteinų kaupimosi liga, susijusi su hidrolazių, ardančių polisacharidinius ryšius, trūkumu. Šios anomalijos pasižymi neurologiniais sutrikimais ir įvairiomis somatinėmis apraiškomis. Fukozidozė ir manozidozė dažniausiai sukelia mirtį vaikystėje, o aspartilgliukozaminurija pasireiškia kaip kaupimosi liga, kuri prasideda vėlai, stipriai protiškai atsilieka ir trunka ilgiau.
1. Kurios ląstelės organelės veikla sutrikusi?
2. Pagal kokius požymius tai galima nustatyti?
5 problema
Patologinių procesų metu ląstelėse dažniausiai padaugėja lizosomų. Remiantis tuo, kilo mintis, kad lizosomos gali atlikti aktyvų vaidmenį ląstelių mirtyje. Tačiau žinoma, kad plyšus lizosomų membranai įtekančios hidrolazės praranda savo veiklą, nes citoplazmoje yra šiek tiek šarminė aplinka.
1. Kokį vaidmenį šiuo atveju atlieka lizosomos, remiantis šios organelės funkciniu vaidmeniu ląstelėje?
2. Kuri ląstelės organelė atlieka lizosomų sintezės funkciją?
6 problema
Nustatyta paveldima liga, kuri yra susijusi su ląstelės organelių funkcionavimo defektais, dėl kurių ląstelėse sutrinka energetinės funkcijos – sutrinka audinių kvėpavimas ir specifinių baltymų sintezė. Ši liga perduodama tik per motinos liniją abiejų lyčių vaikams.
1. Kurioje organelėje įvyko pakitimų?
2. Kodėl ši liga perduodama tik per motinos liniją?
Problema Nr.7
Paprastai, jei ląstelių patologija yra susijusi su peroksisomų nebuvimu kepenų ir inkstų ląstelėse, tada tokia liga sergantis organizmas nėra gyvybingas.
1. Kaip paaiškinti šį faktą remiantis šios organelės funkciniu vaidmeniu ląstelėje?
2. Kokia organizmo negyvybingumo priežastis šiuo atveju?
Problema Nr.8
Žiemą žiemojančių kiaunių ir žiemojančių šikšnosparnių metu širdies raumens ląstelėse smarkiai sumažėja mitochondrijų skaičius.
1. Kokia šio reiškinio priežastis?
2. Kokie dar gyvūnai pasižymi šiuo reiškiniu?
3 pamoka. ŠERDIS, JO STRUKTŪRINIAI KOMPONENTAI. LĄSTELIŲ REPRODUKCIJA
Užduotis Nr.1
Kiaušialąstės branduolys ir spermatozoidų branduolys turi vienodą chromosomų skaičių, tačiau citoplazmos tūris ir citoplazminių organelių skaičius kiaušinėlyje yra didesnis nei spermatozoidų.
1. Ar DNR kiekis šiose ląstelėse yra vienodas?
2. Ar suliejus kiaušialąstę su spermatozoidu, organelių skaičius padidės?
2 užduotis
Genai, kurie turėjo būti aktyvuoti G2 laikotarpiu, liko neaktyvūs.
1. Kokius pokyčius ląstelėje tai sukels?
2. Ar tai turės įtakos mitozės eigai?
Užduotis Nr.3
Dvibranduolė ląstelė su diploidiniais branduoliais (2n=46) pateko į mitozę.
1. Kokį paveldimos medžiagos kiekį ląstelė turės metafazėje, formuojantis vieno dalijimosi velenui?
2. Kiek paveldimos medžiagos turės dukteriniai branduoliai pasibaigus mitozei?
4 užduotis
Po apvaisinimo susidarė zigota 46XX, iš kurios turėtų formuotis moters kūnas. Tačiau pirmojo mitozinio šios zigotos dalijimosi (fragmentacijos) metu į du blastomerus vienos iš X chromosomų seserinės chromatidės, atsiskyrusios viena nuo kitos, neatsiskyrė į 2 polius, o abi persikėlė į vieną polių. Kitos X chromosomos chromatidės atsiskyrė normaliai. Visi vėlesni mitoziniai ląstelių dalijimasis embriogenezės metu įvyko nepažeidžiant mitozės mechanizmo.
2. Kokios gali būti šio organizmo fenotipinės savybės?
5 problema
Po apvaisinimo susidarė zigota 46XY, iš kurios turėtų susidaryti vyriškas organizmas. Tačiau per pirmąjį mitozinį šios zigotos dalijimąsi (suskaldymą) į dvi blastomeras Y chromosomos seserinės chromatidės neatsiskyrė ir visa ši savaime pasikartojanti (atsikartojusi) metafazės chromosoma persikėlė į vieną iš dukterinių ląstelių polių (blastomerų). ). X chromosomų chromatidžių segregacija įvyko normaliai. Visi vėlesni mitoziniai ląstelių dalijimasis embriogenezės metu įvyko nepažeidžiant mitozės mechanizmo.
1. Kokia bus individo, besivystančio iš šios zigotos, chromosomų ląstelių rinkinys?
2. Kokį fenotipą gali turėti šis individas?
3. Kokie veiksniai gali lemti šią mutaciją?
6 problema
Kai ląstelė dalijasi mitozės būdu, viena iš dviejų susidariusių naujų ląstelių neturi branduolio.
1. Kokia branduolio sandara?
2. Prie ko gali privesti šis reiškinys?
Problema Nr.7
Branduolinių porų skaičius nuolat kinta.
1. Kokia yra branduolinės poros sandara?
2. Dėl kokios priežasties pasikeitė porų skaičius branduolio apvalkale?
M.: Agropromizdat, 1988. - 271 p.
ISBN 5-10-000614-5
parsisiųsti(tiesioginė nuoroda) :
praktiumpocitologii1988.djvu Ankstesnis 1 .. 57 > .. >> Kitas
Nuolatinis mikrotomo preparatas su išilginėmis šaknų pjūviais pirmiausia tiriamas mažu mikroskopo padidinimu. Šaknies gale yra aiškiai matoma kepurė, kuri saugo augimo kūgį nuo pažeidimų augimo metu
dirvožemyje. Toliau ateina šaknų augimo kūgis arba ląstelių dalijimosi zona (apie 2 mm). Už augimo kūgio yra pailgėjimo zona, kurioje ląstelės yra pailgintos, o tada siurbimo zona su šaknų plaukeliais. Mitozė tiriama ant šaknies augimo kūgio meristematinių ląstelių, kuriose yra daug besidalijančių ląstelių. Meristema susideda iš stačiakampių ląstelių eilių. Kiekviena ląstelių eilutė nurodo savo kilmę į vieną langelį.
Apžiūrėjus šaknį mažu padidinimu, mėginys turi būti apžiūrimas su 40X objektyvu.
Tarpfazė. Įprastiniuose nuolatiniuose preparatuose branduolio tarpfazinė būsena pasižymi subtilia chromatino struktūra. Šiuo metu chromosomos yra stipriai despiralizuotos ir negali būti aptiktos. Branduoliai yra apvalios formos ir vienalytės granuliuotos struktūros. Iš kitų branduolio komponentų branduoliai yra aiškiai matomi. Naudojant kai kuriuos branduolinius fiksatorius, pavyzdžiui, Brodskį, ir dažant preparatus hematoksilinu, panardinant pro mikroskopą (90X objektyvas) matomas chromatino tinklas ir dideli chromatino grūdeliai, sudarantys chromocentrus augalo ląstelės branduolyje.
Pasibaigus tarpfazei, ląstelės patenka į mitozę. Ląstelių dalijimasis dažniausiai prasideda pakitus branduolyje.
Profazėje (47 pav.) branduolys padidėja, o jame aiškiai matomi chromosomų siūlai, kurie per š.
Ryžiai. 47. Mitozė svogūnų šaknų ląstelėse Allium sulfur (mikrotūrio preparatas):
1 profazė; "2 - metafazė; I - anafazė; 4 - kūno fazė; 5 - tarpfazė.
laikas jau sukosi spirale. Kiekviena chromosoma, po dubliavimosi tarpfazėje, susideda iš dviejų seserinių chromatidžių, sujungtų vienu centromeru. Profazės pabaigoje branduolio apvalkalas ir branduoliai dažniausiai išnyksta.Preparatuose visada galima rasti ankstyvą ir vėlyvą profazę ir palyginti jas tarpusavyje.Chromosomų gijos aiškiau matomos vėlyvoje fazėje, dažnai galima pastebėti, kad jos padvigubėja. .
Metafazė: išnykus branduolinei membranai, aišku, kad chromosomos pasiekė maksimalų kondensaciją, sutrumpėja ir juda link ląstelės pusiaujo, esančio toje pačioje plokštumoje. Šis mitozės laikotarpis vadinamas metafaze. Ląstelėje jau yra mitozinis (achromatino) velenas, susidedantis iš atraminių ir traukiančių siūlų. Pirmasis iš jų tęsiasi nuo vieno poliaus iki kito, o antrasis jungia chromosomų centromerus su poliais.
Ant preparatų, dažytų hematoksilinu, mitoziniai verpstės siūlai ne visada matomi, nes šis dažiklis yra branduolinis. Tačiau mokomajame filme ir kituose preparatuose aiškiai matyti, kad kiekviena chromosoma, prijungta prie mitozinio veleno, susideda iš dviejų lygiagrečių chromatidžių.
Dvigubos chromosomos metafazėje dažniausiai yra statmenos mitoziniams verpstės siūlams ir vienodu atstumu nuo polių. Visų chromosomų centromerai išsidėstę toje pačioje pusiaujo plokštumoje, o tai labai patogu skaičiuojant chromosomas ir tiriant jų morfologiją. “
Mikrotominiai preparatai chromosomų skaičiavimui dažniausiai gaminami iš skersinių šaknų pjūvių, kad metafazė būtų matoma iš poliaus. Šioje padėtyje aiškiai matoma, kad chromosomos yra tam tikru atstumu viena nuo kitos. Šiuo metu juos galima nubraižyti ir suskaičiuoti.
Anafazė prasideda nuo centromerų dalijimosi, o tada įvyksta chromatidžių atsiskyrimas. Kiekvienos chromosomos seserinės chromatidės skiriasi į skirtingus polius. Taip tiksliai pasiskirsto genetinė medžiaga, o kiekviename poliuje yra tiek pat chromosomų, kiek pirminė ląstelė turėjo prieš padvigubėjus. Pavyzdžiui, rugių somatinėse ląstelėse yra 14 chromosomų. Ji yra metafazėje
14 dvigubų (dichromatidinių) chromosomų.Anafazėje po seserinių chromatidų divergencijos poliuose vėl atsiranda 14 chromosomų.
Po centromero atskyrimo kiekviena chromatidė įgyja nepriklausomos chromosomos funkcijas.
Chromatidžių judėjimas į polius atsiranda dėl traukiamųjų siūlų susitraukimo ir mitozinio veleno atraminių siūlų pailgėjimo. Žiūrint mokomąjį filmą akivaizdu, kad šis procesas, lyginant su kitais, vyksta labai greitai
trumpesnėse fazėse ir yra sunkiau aptikti. Todėl anafazė preparatuose yra mažiau paplitusi nei profazė.
Telofazėje kiekvieno poliaus chromosomos dekondensuojasi, t.y. procesas yra priešingas tam, kas vyksta profazėje. Chromosomų kontūrai praranda aiškumą, sunaikinamas mitozinis verpstė, atkuriama branduolio membrana, atsiranda branduolių. Taip po įvairių struktūrinių transformacijų lėtai judanti šerdis buvo padalinta į dvi dukterines. Telofazės metu iš fragmoplasto susidaro ląstelės sienelė, kuri padalija visą citoplazmos turinį į dvi lygias dalis – vyksta citokinezė. Taip baigiasi mitozė.
Atskirų mitozės fazių trukmę galima spręsti iš intravitalinių stebėjimų. Nustatyta, kad žirnių endosperme profazė trunka 40 min., metafazė - 20, anafazė - 12, telofazė - 1,10 min., t.y. pirmoji ir paskutinė mitozės fazės yra ilgiausios. Visa mitozė trunka apie 3 valandas Mitozinio ciklo trukmė kelis kartus ilgesnė. Taigi pupelėse (Vicia fab a) visas mitozinis ciklas trunka 30 valandų, mitozė trunka 4 valandas, o tarpfazė – 26 valandas, iš kurių G\ periodas yra 12 valandų, S – 6 valandos, C2 – 8 valandos. žalia, trumpiausias mitozinis ciklas kai kuriose ląstelėse trunka 8 valandas, o dauguma ląstelių jį užbaigia per 10-12 valandų.Iš trijų tarpfazių periodų Gi periodas yra labiausiai kintantis savo trukme. Mitozės kinetika priklauso nuo įvairių vidinių ir išorinių veiksnių, skysčių lygio, aplinkos pH, hormonų veiklos, temperatūros, apšvietimo sąlygų ir kt.
Mikroskopas naudoja išgaubtų lęšių didinamąją galią, kad sukurtų padidintus labai mažų objektų vaizdus. Fig. P.2.3 pavaizduotas mikroskopas, nurodantis jo struktūros detales. Mikroskopas yra brangus prietaisas, todėl su juo reikia elgtis atsargiai ir nepamiršti šių taisyklių:
1. Laikykite mikroskopą dėžutėje (arba po dangteliu), kad apsaugotumėte nuo dulkių.
2. Abiem rankomis išimkite jį iš stalčiaus ir švelniai padėkite atgal, kad nesutrūktų.
3. Lęšiai turi būti švarūs, kad tai padarytumėte, juos reikia nuvalyti skudurėliu.
4. Mikroskopas visada turi būti sufokusuotas, judindamas mėgintuvėlį aukštyn nuo bandinio. Priešingu atveju labai lengva sugadinti vaistą.
5. Laikykite abi akis atmerktas ir žiūrėkite su jomis paeiliui.
Mikroskopo nustatymas mažam padidinimui
1. Padėkite mikroskopą ant stalo ir atsisėskite patogioje padėtyje. Mikroskopo scenoje tiriamas objektas turi būti apšviestas. Norėdami tai padaryti, naudokite specialų apšvietimą, šviesą iš lango arba iš stalinės lempos. Paskutiniais dviem atvejais naudojamas įgaubtas veidrodžio paviršius, esantis po scena. Naudojant veidrodį šviesa nukreipiama pro skylę scenoje. Jei yra tinkamas kondensatorius, šviesai per jį nukreipiamas plokščias veidrodinis paviršius.
2. Naudodami grubų reguliavimo varžtą pakelkite mikroskopo vamzdelį aukštyn ir pasukite antgalį, kol mažos galios objektyvas (× 10 arba 16 mm) tilps į vamzdelio griovelį (išgirsite spragtelėjimą).
3. Padėkite mėginį, kurį ketinate tirti, ant mikroskopo scenos taip, kad medžiaga po dengiamuoju stiklu būtų virš mikroskopo padėtyje esančios skylės vidurio.
4. Žiūrėdami į sceną ir bandinį iš šono, nuleiskite vamzdelį stambaus reguliavimo varžtu, kol mažos galios objektyvas bus maždaug 5 mm atstumu nuo bandinio.
5. Žiūrėdami pro mikroskopą, sukite stambaus reguliavimo varžtą, kol objektas bus sufokusuotas.
Mikroskopo nustatymas dideliam padidinimui
1. Dirbant su didelio didinimo objektyvu, reikia dirbtinės šviesos, kad būtų sukurtas pakankamas apšvietimas. Norėdami tai padaryti, naudokite stalinę lempą arba specialų mikroskopui skirtą šviestuvą su matine lempute. Dirbant su kaitinama lempa, tarp jos ir mikroskopo būtina įdėti popieriaus lapą. Pasukite veidrodį lygiu paviršiumi į viršų, kad šviesa atsispindėtų mikroskope.
2. Fokusuokite kondensatorių nenuimdami mėginio nuo scenos. Pakelkite kondensatorių taip, kad atstumas tarp jo ir scenos būtų ne didesnis kaip 5 mm. Žiūrėdami pro mikroskopą, sukite stambaus reguliavimo varžtą, kol objektas bus sufokusuotas. Dabar sufokusuokite kondensatorių, kol lempos vaizdas bus tiksliai ant preparato. Padėkite kondensatorių šiek tiek nefokusuodami, kad lempos vaizdas išnyktų. Dabar apšvietimas turėtų būti optimalus. Kondensatoriuje įmontuota diafragma. Jis reguliuoja skylės, pro kurią praeina šviesa, dydį. Ši skylė turėtų būti atidaryta kuo plačiau. Tokiu būdu pasiekiamas maksimalus vaizdo aiškumas (žr. A.2.3 pav.).
3. Sukite antgalį, kol didelio padidinimo objektyvas (×40 arba 4 mm) tilps į angą. Jei židinys jau nustatytas mažu padidinimu, tada, kai pasukate bokštelį, didelio padidinimo objektyvas automatiškai bus maždaug sufokusuotas. Visada fokusuokite pakeldami objektyvą aukštyn, naudodami tikslaus reguliavimo varžtą.
4. Jei perkeliant objektyvą su didelio didinimo lęšiais fokusavimas nenustatytas, atlikite šiuos veiksmus: žiūrėkite į sceną iš šono, nuleiskite mikroskopo vamzdelį, kol objektyvas beveik palies mėginį. Stebėkite objektyvo lęšio atspindį ant preparato ir įsitikinkite, kad objektyvas beveik liečia savo atspindį.
5. Žiūrėdami pro mikroskopą ir sukdami tikslaus reguliavimo varžtą, lėtai kelkite objektyvą, kol vaizdas bus sufokusuotas.
Padidinti
Objektas padidinamas mikroskopu, naudojant okuliarą ir objektyvą (A.2.1 lentelė).
Panardinimas į aliejų
Norint gauti didesnį padidinimą nei naudojant įprastą didelės galios objektyvą, būtina naudoti panardinamąjį lęšį. Objektyvo gebėjimas rinkti šviesą labai padidinamas, kai tarp objektyvo lęšio ir dengiamojo stiklo yra patalpinamas skystis. Skystis turi turėti tokį patį lūžio rodiklį kaip ir pats lęšis. Todėl kedro riešutų aliejus dažniausiai naudojamas kaip skystis.
1. Padėkite bandinį ant scenos ir sufokusuokite vaizdą taip pat, kaip dirbant su įprastu dideliu padidinimu. Vietoj didelio padidinimo objektyvo įdėkite objektyvą su panardinamuoju lęšiu.
2. Užlašinkite lašą kedro aliejaus ant dengiamojo stiklo tiesiai virš tiriamo objekto.
3. Vėl sufokusuokite vaizdą, dabar esant mažam padidinimui, tada pasukite antgalį, kad objektyvas su panardinamuoju lęšiu būtų sumontuotas taip, kad jo galas liestų alyvos lašelį.
4. Žiūrėdami pro mikroskopą, labai atsargiai sufokusuokite objektyvą naudodami tikslaus reguliavimo varžtą. Atminkite, kad objektyvo židinio plokštuma yra tik 1 mm atstumu nuo dengiamojo stiklelio paviršiaus.
5. Baigę minkšta šluoste nuvalykite alyvą nuo objektyvo.